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人全血單個核細(xì)胞分離液的使用

更新時間:2025-06-10      瀏覽次數(shù):34

人全血單個核細(xì)胞分離液的使用步

產(chǎn)品說明:

本產(chǎn)品是一種用于分離人外周血單個核細(xì)胞的無菌、低內(nèi)毒素水平的密度梯度分離液。外 周血中單個核細(xì)胞(PBMC)包括淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞,其體積、形態(tài)和密度與其他細(xì)胞不同,紅細(xì)胞和粒細(xì)胞密度較大,為 1.090 g/mL 左右,淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞密度為 1.075~1.090 g/mL,血小板為 1.030~1.035 g/mL。為此利用一種密度介于 1.0751.092 之間而近于等滲的溶液做密度梯度離心,使一定密度的細(xì)胞按相應(yīng)密度梯度分布,從而將各種血細(xì)胞加以分離。

 

產(chǎn)品指標(biāo):

密度 1.077±0.001g/mL

滲透壓 290~350 mOsm/kg H2O

無菌 0.1μm 濾膜過濾。

 

操作步驟:

1. 取新鮮抗凝全血(EDTA、枸櫞酸鈉或肝素抗凝均可)或者去纖維蛋白血液,用等體積的全血及組織稀釋液或者 PBS 稀釋全血。

2. 在離心管中加入適量分離液(當(dāng)稀釋后血液體積小于 3mL 時,加入 3mL 分離液;大于等于3mL,加入等體積分離液。但二者的總體積不能超過離心管的三分之二,否則會影響分離效果),將稀釋后的血液平鋪到分離液液面上方,注意保持兩液面界面清晰。(可以使用巴氏德吸管吸取血液,然后將血液小心的平鋪于分離液上,因為兩者的密度差異,將形成明顯的分層界面。如果樣品較多加樣時間較長,在離心之前出現(xiàn)紅細(xì)胞成團(tuán)下沉屬正常現(xiàn)象。)

3. 室溫,水平轉(zhuǎn)子 500~1000g,離心 20~30min(血液的體積越大所需的離心力越大,離心時間越長,最佳的分離條件需摸索,離心轉(zhuǎn)速最大不

超過 1200g)。

4. 離心后將出現(xiàn)明顯的分層:最上層是稀釋的血漿層,中間是透明的分離液層,血漿與分離液之間的白膜層即為單個核細(xì)胞層,離心管底部是紅細(xì)胞與粒細(xì)胞。



5. 小心的吸取白膜層細(xì)胞到 15mL 潔凈的離心管中, 10mL PBS 或細(xì)胞洗滌液洗滌白膜層細(xì)胞。250g,離心 10min

6. 棄上清,5mL  PBS 或細(xì)胞清洗液重懸細(xì)胞,250g,離心 10min

7. 重復(fù)步驟6

8. 棄上清,細(xì)胞重懸備用。

 


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