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野生型鏈霉親和素(wild-type streptavidin, wt-SA)使用方法

更新時(shí)間:2025-03-05      瀏覽次數(shù):206

品 名:野生型鏈霉親和素(wild-type streptavidin, wt-SA)

規(guī) 格:1 mg ,10 mg ,100 mg ,500 mg

產(chǎn)品形式:冷凍干粉(5mM 磷酸鉀鹽緩沖液、海藻糖,pH 8.0)

分 子 量:四聚體 66kDa,單體 16.5 kDa

活 性:≥11U/mg 蛋白(Green 改良法測(cè)定)

純 度:≥95%(SDS-PAGE 檢測(cè))

濃度測(cè)定:紫外吸收法,消光系數(shù) E(0.1% at 280 nm)=2.543

來(lái) 源:大腸桿菌發(fā)酵工程菌株

保存條件:-20℃保存
有 效 期:1 年
相關(guān)介紹:
鏈霉親和素(Streptavidin ,SA)是阿維丁鏈霉菌(Streptomyces avidinii)在生長(zhǎng)過(guò)程中分泌的 一種同型四聚體蛋白。同親和素一樣,一摩爾的鏈霉親和素可以結(jié)合四摩爾的生物素,與生物素具 有很高的親和力。由于 SA 不含糖基且等電點(diǎn)接近于中性,因此 SA 在檢測(cè)應(yīng)用中具有比親和素更 低的非特異性結(jié)合水平。
該制品已被廣泛應(yīng)用于多種生物技術(shù)領(lǐng)域,諸如:包被免疫檢測(cè)用微孔板,制備 SA 偶聯(lián)酶制 劑,SA 偶聯(lián)熒光素、SA 偶聯(lián)磁珠等,進(jìn)而參與酶聯(lián)免疫吸附和酶催化放大實(shí)驗(yàn),免疫組化化學(xué)、 生物分子純化、生物傳感器、生物納米微球、預(yù)靶向制藥研究和生物芯片被料等。 (該野生型鏈霉 親和素不帶任何標(biāo)簽,pI:6.1)

使用方法:(僅供參考)

由于產(chǎn)品生產(chǎn)工藝中凍干環(huán)節(jié)會(huì)引入保護(hù)劑等,為減少您的實(shí)驗(yàn)誤差,建議先通過(guò)內(nèi)部檢測(cè)方 法,產(chǎn)品中蛋白進(jìn)行準(zhǔn)確定量后,再進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn),并按實(shí)際情況進(jìn)行產(chǎn)品用量調(diào)整。建議優(yōu)先選擇紫外吸收法進(jìn)行定量,方法如下:
將樣品從低溫條件下拿出后,平衡至室溫,并擦去瓶外附著的冷凝水,小心打開(kāi)瓶蓋,防止干 粉飛濺損失。用去離子水或緩沖液進(jìn)行復(fù)溶,充分溶解后,稀釋至合適濃度,小心移入比色皿中, 以去離子水或緩沖液為空白對(duì)照,測(cè)定樣品在 280 nm 處的吸光值(建議吸光值控制在 0.1-1.5 區(qū)間 內(nèi)),將其代入以下公式計(jì)算蛋白質(zhì)濃度:


式中:C:樣品原液的蛋白質(zhì)質(zhì)量濃度(mg/mL)
A280nm :蛋白質(zhì)溶液在 280nm 處測(cè)得的吸光值 N:稀釋倍數(shù)

E(0.1% at 280nm) :1 mg/mL 蛋白質(zhì)的消光系數(shù)

例如將本產(chǎn)品凍干粉充分溶解并混勻后,取適量原液稀釋 10 倍,測(cè)得其在 280 nm 處的吸光值為 0.7629,則原液的蛋白濃度為 10×0.7629/2.543=3 mg/mL。


注意事項(xiàng):
1. 鏈霉親和素凍干粉易溶于水,溶解性可達(dá) 10 mg / mL 或更高;

2. 建議使用純水溶解;
3. 如有未溶解物質(zhì),建議延長(zhǎng)復(fù)溶時(shí)間。也可以通過(guò)離心或其他方式除去不溶物后,再用于后 續(xù)實(shí)驗(yàn),不會(huì)對(duì)總蛋白產(chǎn)生很大的影響。
4. 考慮到蛋白質(zhì)特殊性,凍干粉建議現(xiàn)用現(xiàn)配,溶解后應(yīng)避免反復(fù)凍融,如需多次使用,建議 按需分裝后凍存(-20℃) ;避免在4℃下長(zhǎng)期存放。


Lane 1 :野生型鏈霉親和素單體
Lane 2 :野生型鏈霉親和素四聚體

注意:本產(chǎn)品僅限于科研使用。 

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