α-葡萄糖苷酶(α-GC)檢測試劑盒五一*
測定意義:α-GC(EC 3.2.1.20)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,催化水解芳基或烴基與糖基之間的α-糖苷鍵生成葡萄糖,不僅與細胞壁的松弛或加固有關,而且與細胞識別和一些信號分子產生密切相關。
根據國際生化聯合會(IVB)采納的酶學委會(EC)提出的系統命名及系統分類將酶分為6大類:氧化還原酶、轉移酶、裂合酶、異構酶、水解酶。α-葡萄糖苷酶為水解酶的一種。測定酶類是臨床生化檢驗中常做的項目之一。
測定原理:α-GC分解對-硝基苯-α-D吡喃葡萄糖苷生成對-硝基苯酚,后者在400nm有大吸收峰,通過測定吸光值升高速率來計算α-GC活性。
需要的儀器,耗材:可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
注意:實驗之前建議選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者
增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器、冰
和蒸餾水。
操作步驟:
一、樣本處理(可適當調整待測樣本量,具體比例可以參考文獻)
細菌或培養細胞的處理:收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照每 1000 萬細菌或細胞加入 1mL提取液,超聲波破碎細菌或細胞(功率 20%,超聲 3 秒,間隔 10 秒,重復 30 次),15000g,4℃,離心 20min,取上清,置冰上待測。組織的處理:稱取約 0.2g 組織,加入 1mL 提取液進行冰浴勻漿;15000g,4℃,離心 20min,取上清,置冰上待測。