HPLC色譜峰異常的原因以及解決方法，速來看！

高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography \ HPLC）又稱“高壓液相色譜”、“高速液相色譜”、“高分離度液相色譜”、“近代柱色譜”等。高效液相色譜是色譜法的一個重要分支，以液體為流動相，采用高壓輸液系統(tǒng)，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內(nèi)各成分被分離后，進入檢測器進行檢測，從而實現(xiàn)對試樣的分析。該方法已成為化學(xué)、醫(yī)學(xué)、工業(yè)、農(nóng)學(xué)、商檢和法檢等學(xué)科領(lǐng)域中重要的分離分析技術(shù)應(yīng)用

A.峰拖尾 

原因                 解決辦法 

1.篩板阻塞；     1．a(chǎn).反沖色譜柱； b.更換進口篩板； c.更換色譜柱； 

2.色譜柱塌陷； 2. 填充色譜柱； 

3.干擾峰；       3. a.使用更長的色譜柱； b.改變流動相或更換色譜柱； 

4.流動相pH選擇錯誤； 4.調(diào)整pH值，對于堿性化合物，低pH值更有利于得到對稱峰； 

5.樣品與填料表面的溶化點發(fā)生反應(yīng)； 5.a.加入離子對試劑或堿性揮發(fā)性修飾劑。b.更改色譜柱。 B.峰前延 

原因               解決辦法 

1.柱溫低； 1.升高柱溫； 

2.樣品溶劑選擇不恰當(dāng)； 2.使用流動相作為樣品溶劑； 

3.樣品過載； 3.降低樣品含量； 

4.色譜柱損壞； 4.見A1、A2； C.峰分叉 

原因              解決辦法 

1.保護柱或分析柱污染； 1.取下保護柱再進行分析；如果必要更換保護柱；如果分析柱阻塞，拆下來清洗；如果問題仍然存在，可能是柱子被強保留物質(zhì)污染，運用適當(dāng)?shù)脑偕胧蝗绻麊栴}仍然存在，入口可能被阻塞，更換篩板或更換色譜柱。 

2.樣品溶劑不溶于流動相； 2.改變樣品溶劑；如果可能采取流動相作為樣品溶劑； D.峰變形 

原因            解決辦法 

1.樣品過載； 1.減少樣品載量； E．早出的峰變形 

原因           解決辦法 

1.樣品溶劑選擇不恰當(dāng)； 1. a.減少進樣體積； b.運用低極性樣品溶劑； F．早出的峰拖尾程度大于晚出的峰 

原因           解決辦法 

1．柱外效應(yīng)； 1. a.調(diào)整系統(tǒng)連接（使用更短、內(nèi)徑更小的管路）； b.使用小體積的流通池； G．K’增加時，脫尾更嚴(yán)重 

原因          解決辦法 

1.二級保留效應(yīng)，反相模式； 1. a.加入三乙胺（或堿性樣品）； b.加入乙酸（或酸性樣品）； c.加入鹽或緩沖劑（或離子化樣品）； d.更換一支柱子； 

2.二級保留效應(yīng)，正相模式； 2. a.加入三乙胺（或堿性樣品）； b.加入乙酸（或酸性樣品）； c.加入水（或多官能團化合物）； d.試用另一種方法； 

3.二級保留效應(yīng)，離子對； 3.加入三乙胺（或堿性樣品）； H．酸性或堿性化合物的峰拖尾 

原因         解決辦法 

1.緩沖不合適； a.使用濃度50～100mM的緩沖液； b.使用P ka等于流動相pH值的緩沖液； I．額外的峰 

原因         解決辦法 

1.樣品中有其他組份； 1.正常； 

2.前一次進樣的洗脫峰； 2. a.增加運行時間或梯度斜率； b.提高流速； 

3.空位或鬼峰； 3. a.檢查流動相是否純凈； b.使用流動相作為樣品溶劑； c.減少進樣體積； J.保留時間波動 

原因           解決辦法 

1.溫控不當(dāng)； 1.調(diào)好柱溫； 

2.流動相組分變化 2.防止變化（蒸發(fā)、反應(yīng)等）； 

3.色譜柱沒有平衡； 3.在每一次運行之前給予足夠的時間平衡色譜柱； K.保留時間不斷變化 

原因           解決辦法 

1.流速變化； 1.重新設(shè)定流速； 

2.泵中有氣泡； 2.從泵中除去氣泡； 

3.流動相選擇不恰當(dāng)； 3. a.更換合適的流動相； b.選擇合適的混合流動相； L.基線漂移 

原因          解決辦法 

1.柱溫波動；（即使很小的溫度變化都會引起基線波動；通常影響示差檢測器、電導(dǎo)檢測器、較低靈敏度的紫外檢測器或其它光電類檢測器；） 1.控制好柱子和流動相的溫度，在檢測器之前使用熱交換器； 

2.流動相不均勻；（流動相條件變化引起的基線漂移大于溫度導(dǎo)致的漂移） 2.使用HPLC級的溶劑，高純度的鹽和添加劑；流動相在使用前進行脫氣，使用中使用氦氣； 

3.流通池被污染或有氣體； 3.用甲醇或其他強極性溶劑沖洗流通池；如有需要，可以用1N的硝酸。（不要用鹽酸） 

4.檢測器出口阻塞；（高壓造成流通池窗口破裂，產(chǎn)生噪音基線） 4.取出阻塞物或更換管子；參考檢測器手冊更換流通池窗； 

5.流動相配比不當(dāng)或流速變化； 5.更改配比或流速；為避免這個問題可定期檢查流動相組成及流速； 

6.柱平衡慢，特別是流動相發(fā)生變化時； 6.用中等強度的溶劑進行沖洗，更改流動相時，在分析前用10～20倍體積的新流動相對柱子進行沖洗； 

7.流動相污染、變質(zhì)或由低品質(zhì)溶劑配成； 7.檢查流動相的組成；使用高品質(zhì)的化學(xué)試劑及HPLC級的溶劑； 

8.樣品中有強保留的物質(zhì)（高K’值）以饅頭峰樣被洗脫出，從而表現(xiàn)出一個逐步升高的基線。 8.使用保護柱，如有必要，在進樣之間或在分析過程中，定期用強溶劑沖洗柱子。 

9.使用循環(huán)溶劑，但檢測器未調(diào)整。 9.重新設(shè)定基線；當(dāng)檢測器動力學(xué)范圍發(fā)生變化時，使用新的流動相； 

10.檢測器沒有設(shè)定在大吸收波長處； 10.將波長調(diào)整至大吸收波長處； M.基線噪音（規(guī)則的）