1. 為什么這個DMEM培養基是鮮紅色的?
培養基的顏色主要是酚紅來顯示的,酚紅指示顏色非常靈敏,p值范圍為6-8,顏色由黃變為紫紅。酚紅不是必須的,在有些情況下甚至是多余的,酚紅有類似固醇類激素的作用,如果涉及到固醇類激素相關的細胞培養,盡量不要添加。但是為了培養方便,能讓我們直觀地感覺培養液的狀況,加入酚紅后,如果培養液偏酸了,就顯示偏黃色,偏堿性了就顯示偏紫色。
2. 為什么培養皿放在一個沒有開啟CO2的孵箱里面,培養液顏色偏紫色?
一般的DMEM使用的緩沖體系是NaHCO3, 初中的時候應該見過如下的方
2NaHCO3=Na2CO3+CO2+H2O
在沒有CO2的孵箱中,培養液中的CO2一直溢出,碳酸變少了,溶液變堿性了,就偏紫色了。 同時我們打開了很久的DMEM瓶里面的培養液也會慢慢偏紫色,也就是這個道理。
3. 什么時候溶液會變為黃色?
一般污染細菌的時候或者長時間不換液,溶液變為黃色主要是酸性物質太多,細菌和細胞過度增長都會產生酸性物質,溶液會變為黃色。
4. 培養基偏紫色了還能用不?
可以將該偏紫色的培養基置于CO2孵箱中,擰松瓶蓋。一段時間之后你會發現顏色變為鮮紅色了,那么可以繼續接著用。但是不要使用過長時間未用完并且變色的培養液,置于空氣下氧化之后培養基成分可能已發生了變化。
5. 哪些情況下不得使用酚紅?
如前面所說的酚紅有類似固醇類激素的作用,如果涉及到固醇類激素相關的細胞培養,不要添加。另外在做流式細胞的時候,酚紅會對結果產生影響,因此也不要添加。
6. 有沒有不受CO2影響的培養基?
有,如果緩沖體系不是NaHCO3,而是其他體系如HEPES,就不受CO2的影響。
7. 常用的培養基有哪些?
MEM(Minimum Essential Medium): 也稱低必須培養基,它僅含有12種必須氨基酸、谷氨酰胺和8種維生素??梢詮V泛應用到各種細胞培養。
DMEM:分為高糖和低糖,碳酸氫鈉緩沖體系,所以需要CO2。
高糖的適合于高密度懸浮細胞培養,適用于附著性較差,但又不希望它脫離原來生長點的細胞。 低糖的適合于生長速度較快,附著性較差的腫瘤細胞培養。
DMEM/F12:F12 培養基成分復雜,含有多種微量元素,和DMEM以1:1結合,稱為DMEM/F12培養基(DME/F12medium),作為開發無血清配方的基礎,以利用F12含有較豐富成分和DMEM含有較高濃度的營養成分為優點。該培養基適用于血清含量較條件下哺乳動物細胞培養。
RPMI-1640:主要用于懸浮細胞培養,廣泛用于哺乳物,特殊造血細胞,正?;蛘邜盒栽錾陌准毎s交瘤細胞。 另外K-562, L-60、urkat、IM-9 等淋巴細胞、T細胞淋巴瘤細胞也可以使用。
McCoy’s 5A : 主要用于肉瘤細胞的培養, 還可以用于骨髓、皮膚、肺等原代培養,用于作組織活檢培養、一些淋巴細胞培養以及一些難培養細胞的生長支持。比如HT29,BHL100等上皮細胞。
IMDM(Iscove’s Modified Dulbecco Medium):主要用于紅細胞和巨噬細胞前體培養。培養液中含有微量元素硒以及額外的氨基酸和維生素、丙酮酸鈉以及HEPES。
M199 Medium 是具有確定化學成分的細胞培養液,主要用于雞胚成纖維細胞培養,培養時必須輔助血清才能長期培養。
L-15(Leibovitz Medium) 適用于在CO2缺乏的情況下培養腫瘤細胞株,用于快速增值瘤細胞的培養。
Ham’s F-10: 適用于小鼠細胞以及人的二倍體細胞的培養
Ham’s F-12: 適用于單細胞培養或者克隆培養, 是無血清培養基中常用的基礎培養基。
MCDB131: 適用于培養內皮細胞。
Opti-MEM I Reduced Serum Media: 適用于培養造血細胞。