植物乙烯（ETH）ELISA試劑盒應該怎么用？

產品簡介：

乙烯是由兩個碳原子和四個氫原子組成的化合物。兩個碳原子之間以雙鍵連接。乙烯存在于植物的某些組織、器官中，是由蛋氨酸在供氧充足的條件下轉化而成的。
乙烯是合成纖維、合成橡膠、合成塑料（聚乙烯及聚氯乙烯）、合成乙醇（酒精）的基本化工原料，也用于制造氯乙烯、苯乙烯、環(huán)氧乙烷、醋酸、乙醛、乙醇等，尚可用作水果和蔬菜的催熟劑，是一種已證實的植物激素。
乙烯是世界上產量zui大的化學產品之一，乙烯工業(yè)是石油化工產業(yè)的核心，乙烯產品占石化產品的75%以上，在國民經濟中占有重要的地位。世界上已將乙烯產量作為衡量一個國家石油化工發(fā)展水平的重要標志之一。
生理作用是：三重反應、促進果實成熟、促進葉片衰老、誘導不定根和根毛發(fā)生、打破植物種子和芽的休眠、抑制許多植物開花（但能誘導、促進菠蘿及其同屬植物開花）、在雌雄異花同株植物中可以在花發(fā)育早期改變花的性別分化方向等。

實驗原理：

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中植物乙烯（ETH）水平。用純化的植物乙烯（ETH）捕獲抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被的微孔中依次加入植物乙烯（ETH），再與HRP標記的檢測抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的植物乙烯（ETH）呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中植物乙烯（ETH）含量。

植物乙烯（ETH）ELISA試劑盒應該怎么用？

操作步驟：

1.標準品的加樣：設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；。
2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3.加酶：每孔加入酶標試劑100μl，空白孔除外。
4.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘。
5.配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。
6.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
7.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘. 
8.終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
9.測定：以空白孔調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

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實驗時需要注意哪些：

1、試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

2、濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

3、各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間zuihao控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。

4、請每次測定的同時做標準曲線，zuihao做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數（×n×5）。

5、封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6、底物請避光保存。

7、嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

8、所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9、本試劑不同批號組分不得混用。

植物乙烯（ETH）ELISA試劑盒應該怎么用？