大鼠載脂蛋白B100(Apo-B100)elisa試劑盒基本信息簡(jiǎn)介

血漿脂蛋白中的蛋白質(zhì)部分稱為載脂蛋白，主要分A、B、C、D、E五類，主要在肝(部分在小腸)合成，載脂蛋白是構(gòu)成血漿脂蛋白的重要組分。基本功能是運(yùn)載脂類物質(zhì)及穩(wěn)定脂蛋白的結(jié)構(gòu)，某些載脂蛋白還有激活脂蛋白代謝酶、識(shí)別受體等功能。主要在肝(部分在小腸)合成，按ABC系統(tǒng)命名，各類又可細(xì)分幾個(gè)亞類，以羅馬數(shù)字表示。血漿脂蛋白中的蛋白質(zhì)部分稱為載脂蛋白。載脂蛋白是構(gòu)成血漿脂蛋白的蛋白質(zhì)組分，主要分A、B、C、D、E五類。基本功能是運(yùn)載脂類物質(zhì)及穩(wěn)定脂蛋白的結(jié)構(gòu)，某些載脂蛋白還有激活脂蛋白代謝酶、識(shí)別受體等功能。主要在肝(部分在小腸)合成，按ABC系統(tǒng)命名，各類又可細(xì)分幾個(gè)亞類，以羅馬數(shù)字表示。

載脂蛋白是構(gòu)成血漿脂蛋白的重要組分，賦予脂類以可溶的形式，而且在血漿脂蛋白代謝中起重要作用：(1)促進(jìn)脂類運(yùn)輸；(2)調(diào)節(jié)酶活性；(3)引導(dǎo)血漿脂蛋白同細(xì)胞表面受體結(jié)合。是功能上極其活躍的一組血漿蛋白質(zhì)。人的載脂蛋白有兩種表達(dá)形式:apoB-48和apob-100。該基因的序列在肝、腸組織細(xì)胞中是相同的,但產(chǎn)物不同。在肝細(xì)胞中,產(chǎn)物為4563個(gè)氨基酸殘基的肽：apoB-100;但在腸細(xì)胞中,產(chǎn)物為只含2152個(gè)氨基酸殘基的apoB-48,缺失了apoB-100的N端同LDL受體結(jié)合的結(jié)構(gòu)域。原因是在mRNA水平上將2153位的谷氨酰胺的密碼子CAA中的C編輯成為U,形成一個(gè)終止密碼子—UAA,結(jié)果使蛋白質(zhì)的合成提前終止,合成一個(gè)新的相對(duì)分子質(zhì)量約為250kDa的蛋白質(zhì)。

大鼠載脂蛋白B100(Apo-B100)elisa試劑盒操作方法

實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，請(qǐng)?zhí)崆芭渲煤盟性噭噭┗驑悠废♂寱r(shí)，均需混勻，混勻時(shí)盡量避免起泡。每次檢測(cè)都應(yīng)該做標(biāo)準(zhǔn)曲線。如樣品濃度過(guò)高時(shí)，用樣品稀釋液進(jìn)行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍。

1. 加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘。

為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加生物素標(biāo)記抗體工作液 100μl（取1μl生物素標(biāo)記抗體加99μl生物素標(biāo)記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時(shí)內(nèi)配制），37℃,60分鐘。

3. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。

4.每孔加辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素工作液（同生物素標(biāo)記抗體工作液） 100μl，37℃，60分鐘。

5. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。

6. 依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時(shí)肉眼可見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度藍(lán)色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。

7.依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。

8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度（OD值）。 在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。

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