国产成人无码免费视频97app-一区二区在线 | 欧洲-亚洲熟妇色自偷自拍另类-中文字幕有码无码av-日韩久久无码精品不卡一区二区电影

新聞中心/ NEWS

我的位置:首頁  >  新聞中心  >  ELISA試劑盒和溫氏附紅細胞體PCR檢測方法的建立

ELISA試劑盒和溫氏附紅細胞體PCR檢測方法的建立

更新時間:2015-08-11      瀏覽次數(shù):1519

邊緣無漿體病和附紅細胞體病是影響?zhàn)B牛業(yè)的兩種主要的寄生蟲疾病。兩種病的臨床表現(xiàn)均表現(xiàn)為貧血、黃疸、食欲不振、消瘦等。

邊緣無漿體和附紅細胞體都是寄生于血液中的寄生蟲,染色鏡檢很難區(qū)分,因此本實驗室分別建立邊緣無漿體和附紅細胞體的實驗室檢測方法用于它們的臨床調(diào)查。 無漿體病(Anaplasmosis)是由邊緣無漿體(A.marginle)經(jīng)蜱傳播而引起的一種傳染性血液寄生蟲病。本病廣泛存在于世界各種地理條件之下,本病主要引起牛、羊、鹿等家畜發(fā)病,嚴重的可以致死,牛死亡率可達80%。它是阻礙養(yǎng)牛業(yè)發(fā)展的幾種主要蜱傳播疾病中分布zui廣的一種。

本文選取邊緣無漿體部分基因構(gòu)建載體并進行表達,以此表達蛋白為抗原建立邊緣無漿體間接ELISA檢測方法,用于調(diào)查邊緣無漿體的流行病學。并為邊緣無漿體檢測試劑盒的建立奠定基礎(chǔ)。 根據(jù)GenBank公布的邊緣無漿體MSP5基因序列(AY714547)設(shè)計一對引物,用PCR方法從無菌頸靜脈采集姬姆薩染色鏡檢邊緣無漿體為陽性的牛血的DNA模板中擴增MSP5基因582bp的片斷。將該片段克隆到原核表達載體pGEX-KG中,構(gòu)建原核表達載體KG-MSP5,轉(zhuǎn)化BL21,在IPTG的誘導下表達大小約46kD的蛋白。利用BugBuster GST Bind,Purification Kit將其純化,經(jīng)Western blot分析表明,該蛋白具有良好的免疫反應(yīng)活性。 將可溶性表達產(chǎn)物變性和復性后包被酶標板建立了間接ELISA方法,特異性試驗表明其只能特異性地與邊緣無漿體反應(yīng)。與試劑盒(cELISA方法.VMRD,Inc.)同時檢測478份臨床樣品,符合率為98.54%。利用該方法對湖北省、江蘇省、新西蘭、澳大利亞、加拿大466份臨床樣品進行調(diào)查,結(jié)果表明湖北省樣品中邊緣無漿體陽性率分別為12.89%,而江蘇省、新西蘭、澳大利亞、加拿大樣品中未檢測到邊緣無漿體。 附紅細胞體病是由附紅細胞體(Eperythrozoon)寄生于多種動物的紅細胞表面、血漿及骨髓中引起的一種人畜共患病。關(guān)于附紅細胞體的分類地位目前仍有爭議,傳統(tǒng)的分類學方法將附紅細胞體列為立克次氏體,但是近年來16S rRNA基因的系統(tǒng)發(fā)育分析的結(jié)果表明,附紅細胞體更接近于支原體(Mycoplasma)。近幾年,國內(nèi)對該病的報道日益增多,它給畜牧業(yè)造成巨大的損失。 到目前為止,溫氏附紅細胞體還沒有能夠純培養(yǎng)。實驗室檢測方法也一般以顯微鏡鏡檢為主,在紅細胞表面或血漿中能看到溫氏附紅細胞體的存在。但是顯微鏡鏡檢的敏感性和特異性較差,而且及易造成假陽性。血清學方法也存在著沒有較好的抗原制備方法以及不能區(qū)分是否是正在感染蟲等局限性。近來,DNA雜交、PCR等實驗方法提高了檢測方法的靈敏度。


為建立特異、敏感、快速的溫氏附紅細胞體診斷方法,根據(jù)本實驗室已測得的溫氏附紅細胞體16S rRNA基因序列(Genbank登陸號為AY946266),設(shè)計一對種特異性引物,建立了溫氏附紅細胞體的PCR診斷方法。特異性試驗和敏感性試驗表明,此診斷方法只能特異性地擴增溫氏附紅細胞體的16S rRNA基因序列的特異性片段,檢測溫氏附紅細胞體zui低DNA量為1.78fg。利用該方法對湖北省和江蘇省溫氏附紅細胞體感染情況進行了流行病學調(diào)查,結(jié)果顯示陽xing感染率分別為10.3%和3.5%,從分子生物學水平證明了溫氏附紅細胞體在兩省的存在。根據(jù)臨床樣品調(diào)查結(jié)果顯示,本文建立的PCR方法比姬姆薩染色鏡檢準確特異,姬姆薩染色鏡檢方法易出現(xiàn)假陽性。

主站蜘蛛池模板: 日日碰狠狠躁久久躁综合网| 丝袜美腿精品国产一区| 饥渴丰满少妇大力进入| 亚洲成aⅴ人最新无码| 国产成人夜色高潮福利影视| 中文有码人妻字幕在线| 国产va免费精品高清在线| 在线精品亚洲一区二区三区| 狠狠色噜噜狠狠狠狠av不卡| 综合色天天鬼久久鬼色| 人妻少妇中文字幕久久| 黑人上司粗大拔不出来电影 | 一区二区不卡电影| 欧美性猛交xxxx乱大交极品| 中文字幕人妻被公上司喝醉| 免免费国产aaaaa片| 男人把女人桶到爽免费应用| 80s国产成年女人毛片| 精品国产av一区二区果冻传媒| 日本高清视频在线一区二区 | 四虎影视www在线播放| 久久精品日韩av无码| 久久久一区国产| 亚洲人成色99999在线观看| 97成人碰碰久久人人超级碰oo | 国产成熟妇女性视频电影| 国产又黄又爽又硬视频区一区二 | 欧美日韩国产精品一区二区三区不卡| 亚洲色一区二区三区四区| 国产午夜影视大全免费观看| 国产成人精品视觉盛宴| 亚洲综合色自拍一区| 亚洲日本一区二区三区在线| 激情春色一区二区小说网| 日韩一区二区三区女优丝袜| 永久免费看一区二区看片| 国产美女口爆吞精普通话| 亚洲a∨毛片一区| 精品国产一区二区三区久久影院| 女同另类一区二区三区| 九九热在线视频精品店|