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原位雜交實(shí)驗(yàn)的注意事項(xiàng)

更新時(shí)間:2023-09-13      瀏覽次數(shù):795

原位雜交實(shí)驗(yàn)的注意事項(xiàng)

 

組織取材 。組織取材應(yīng)盡可能新鮮。
 
增強(qiáng)組織的通透性和核酸探針的穿透性 。去污劑處理:最常應(yīng)用的去污劑是Triton X-100,注意過度去污劑處理不僅影響組織的形態(tài)結(jié)構(gòu),而且還會(huì)引起靶核酸的丟失。蛋白酶處理:蛋白酶消化能使經(jīng)固定后被遮蔽的靶核酸暴露,以增加探針對靶核酸的可及性。
 
雜交緩沖液孵育 。雜交前用不含探針的雜交緩沖液在雜交溫度下孵育2h,以阻斷玻片和標(biāo)本中可能與探針產(chǎn)生非特異性結(jié)合的位點(diǎn),達(dá)到減低背景的目的。
 
防止污染 。在整個(gè)雜交前處理過程中都需要戴消毒手套,實(shí)驗(yàn)所用玻璃器皿及鑷子都應(yīng)于實(shí)驗(yàn)前一日置高溫烘烤(180℃)以達(dá)到消除RNA酶的目的。雜交前及雜交時(shí)所用的溶液均需經(jīng)高壓消毒處理。
 
雙鏈DNA探針和靶DNA的變性 。雜交反應(yīng)進(jìn)行時(shí),探針和靶核酸都必須是單鏈的。
 
原位雜交實(shí)驗(yàn)的注意事項(xiàng)
 


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