GUS染色液使用說明！
 

　　GUS(β-Galactosidase)基因是存在于E.coli等一些細菌基因組內(nèi)的編碼β-葡萄糖苷酸酶的一種水解酶，該基因常作為融合標記用于植物轉(zhuǎn)基因分析和調(diào)控研究中。GUS受體基因系統(tǒng)有表達E.coli GUS酶的穩(wěn)定性和在植物內(nèi)的低活性，絕大多數(shù)植物沒有檢測到葡萄糖苷酸酶的背景活性，以β-葡萄糖苷酸酯類物質(zhì)為底物，其反應(yīng)產(chǎn)物可用多種方法檢測出來。5-Bromo-chloro-3-indolyl β-D-glucuronide，cyclohexylammonium salt(簡稱為X-Gluc或X-GlcA)分子量為521.8，CAS號為18656-96-7，是檢測大腸桿菌中GUS基因的底物，可快速檢測植物中GUS基因融合標記。
 

　　GUS染色液(即用型)又稱β-葡萄糖苷酶基因染色試劑盒(β-Galactosidase Reporter Gene Staining Kit)簡稱為GUS染色液，其染色原理是適宜的反應(yīng)條件下β-葡萄糖苷酶(GUS)可將X-Gluc水解成藍色物質(zhì)，該物質(zhì)不溶解于轉(zhuǎn)基因的細胞核組織中的靛藍物質(zhì)，具有GUS活性的部位或位點呈現(xiàn)藍色或藍色斑點，可用肉眼或顯微鏡觀察到，GUS染色液可用于生物化學(xué)活性分析、免疫分析以及組織和細胞的組織化學(xué)染色，多用于轉(zhuǎn)基因植物的GUS基因表達分析，該即用型試劑比常規(guī)GUS染色液操作簡便。
 

　　實驗所需用品：
 

　　70%乙醇、去離子水、小瓶或多孔板、顯微鏡
 

　　操作步驟(僅供參考)
 

　　1、配制X-Gluc溶液(50x)：取1ml X-Gluc Solution*加至1支X-Gluc中，充分溶解，即獲得X-Gluc溶液(50x)。配制好的X-Gluc溶液(50x)-20℃保存，1個月有效。
 

　　2、配制X-Gluc染色液：取適量的X-Gluc溶液(50x)和GUS Buffer，按1：49比例充分混勻，配制成X-Gluc染色液，如取0.2ml X-Gluc溶液(50x)加入到9.8ml GUS Buffer中，即配成10ml GUS染色液，該染色液現(xiàn)用現(xiàn)配，短期貯存可以4℃保存3天。
 

　　3、取適量待染葉片等組織加入適量GUS染色液使其*浸沒組織。
 

　　4、37℃孵育1~24h，隨著孵育時間的延長，藍色漸漸出現(xiàn)，當表達量較高時GUS活性的部位或位點呈現(xiàn)藍色或藍色斑點。
 

　　5、用70%乙醇脫去樣本的葉綠素，一般樣本浸沒于乙醇1～3h，至陰性對照呈白色。如有必要可重復(fù)該脫色步驟，以便*清除葉綠素；樣本保存于乙醇中，可用肉眼或普通光學(xué)顯微鏡下觀察，白色背景上的藍色即為GUS表達位點。
 

　　注意事項：
 

　　1、GUS染色液在冰上配制，可以4℃避光保存3天。
 

　　2、由于組織特異性等原因，藍色顏色反應(yīng)可能不*一致，應(yīng)注意摸索具體實驗條件。
 

　　3、擬南芥的根、花和葉片以及煙草幼苗根就可直接染色；煙草和馬鈴薯這些植物的莖和葉須在染色前切成薄片(1~3mm)。
 

　　4、當操作大的組織和樣品時可以選用真空滲入法來幫助底物和酶滲入細胞。
 

　　5、GUS染色液(即用型)染色靈敏度較好，但有時會出現(xiàn)非特異性反應(yīng)(即假陽性)。
 

　　6、本產(chǎn)品僅供科研實驗用，不做其它用途！