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如何分離特定細胞

更新時間:2020-10-24      瀏覽次數(shù):893

如何分離特定細胞

 

平臺和蛋白質(zhì)都可能對合成生物學家和生物醫(yī)學研究人員非常有用。他們通常需要挑選出具有特定視覺表型的細胞,例如形狀或活性,這些形狀或活性取決于其遺傳或表觀遺傳組成或發(fā)育歷史。

Rice研究生,Jihwan(James)Lee和FrançoisSt-Pierre,貝勒醫(yī)學院的神經(jīng)科學助理教授,Rice的電氣和計算機工程兼-職助理教授,他們的團隊在《科學進展》中報告了他們的研究結果。

休斯頓-(2020年10月23日)-萊斯大學和貝勒醫(yī)學院的研究人員開發(fā)了一種分離特定細胞的新方法,并在此過程中發(fā)現(xiàn)了更強大的熒光蛋白。

 

Lee和他的同事稱他們的平臺SPOTlight為單細胞表型觀察和帶標記的簡稱。它解決了現(xiàn)有分選技術的局限性,無法從異類種群中分離具有*特征的單個活細胞。

然后,他們利用蛋白質(zhì)工程方法開發(fā)了迄今為止報道的光穩(wěn)定的黃色熒光蛋白質(zhì)。

Lee是第一作者,也是圣皮埃爾貝勒實驗室的賴斯系統(tǒng),合成和物理生物學項目的學生,他說:“我們基本上開發(fā)了一個平臺,可以篩選單個細胞的時空特性。”

他說:“這是通過首先在顯微鏡下觀察細胞來完成的。”“這些細胞表達一種特殊的蛋白質(zhì),這樣一來,在所需的細胞上照亮一點就能使它們變成紅色。然后,我們可以使用一種稱為流式細胞儀的通用裝置,輕松地將紅細胞與其余細胞分離。”

該“特殊的”可光激活的熒光蛋白在被紫光照射后不可逆地從黑暗轉變?yōu)槊髁痢R部梢允褂每晒饣罨娜玖洗娴鞍踪|(zhì)。實際上,細胞具有持久標簽。

為了僅標記感興趣的細胞,該團隊使用了數(shù)字微鏡設備,該微型微鏡驅動的陣列也用于數(shù)字投影儀中,以使其能夠點亮單個細胞。Lee說:“這些微鏡旋轉并旋轉以定義樣品區(qū)域,直至單個細胞。”“這都是自動化的。有一個電動顯微鏡載物臺,可將成像板上的細胞移動到預定區(qū)域附近,而DMD僅在特定細胞上照射光。”

通過SPOTlight,研究人員可以隨時間觀察成千上萬的人類或酵母細胞,以發(fā)現(xiàn)具有理想細胞動力學,亞細胞結構或形狀的細胞。然后可以使用自定義軟件來識別具有所需配置文件的所有單元,并指示光源和DMD用紫光對它們進行光激活。

李說,原型機可以在45秒到1分鐘內(nèi)標記單個細胞。他說:“這取決于光的力量。”“有了更強大的光源,我們應該能夠更快地做到這一點,也許每個單元只需幾秒鐘。”

“然后,我們使用流式細胞儀或細胞分選儀,可以檢測并回收我們標記的細胞,而丟棄其余的細胞,”李說。“在我們回收了感興趣的細胞后,我們可以將它們送去測序或進行進一步的研究。”

 

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