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上海信帆生物:干擾素(IFN)生物學活性檢測

更新時間:2016-05-13      瀏覽次數(shù):1184

干擾素(IFN)根據(jù)其產(chǎn)生細胞不同和理化性質(zhì)、犐z物學特性的差異可分為α干擾素(IFN-α)、β干擾素(IFN-β)和γ-干擾素(IFN-γ)。它們在機體免疫調(diào)節(jié)、抗病毒感染中具有重要作用。檢測IFN的方法主要分為定量測定(常用elisa)和生物學活性的檢測,后者較為常用。 
  (一)原理 
  干擾素能刺激某些指示細胞(如人羊膜上皮細胞Wish株、人喉癌細胞株Hep-2以及人胚肌皮或肺單層細胞)產(chǎn)生抗病毒蛋白,從而使細胞免受水皰性口炎病毒(VSV)的攻擊,根據(jù)待測樣品不同稀釋度的保護能力,計算出干擾素生物學活性單位。 
  (二) 操作步驟 
        96孔培養(yǎng)板中加入不同稀釋度的IFN和標準IFN, 
        每個稀釋度設3孔,每孔50μl,病毒對照不加IFN 
                  ↓ 
          每孔加入100μl 1.5~2×105/ ml Wish 
          或Hep-2細胞懸液,37℃、CO孵箱培養(yǎng)6~12h, 
          使細胞貼壁為單層 
                  ↓ 
          每孔加入50μl含100個 TCID50 VSV, 
         細胞對照不加病毒液 
                  ↓ 
          根據(jù)細胞病變狀態(tài),終止培養(yǎng)前3~4h 
          加入5mg/ml MTT, 15μL/孔 
                  ↓ 
          加入適量生理鹽水,用滴管輕輕吹吸 
          棄去懸浮病變細胞和死細胞 
                  ↓ 
          200μl/孔 二甲亞砜(DMSO),作用10min 
                  ↓ 
          測OD(570nm),表示活細胞中含甲 的量, 
          也可用剛果紅攝入法、結(jié)晶紫染色法 
             測定IFN對活細胞的保護水平 
  計算: 
  以保護半數(shù)(50%)細胞免受病毒損害的zui高干擾素稀釋度為1個干擾素活性單位。也可從標準曲線中求得待測樣品的IFN活性單位。 
  (三) 試劑和器材 
  1. VSV 
  2. WISH、HeP-2細胞株或人胚肌皮或肺單層培養(yǎng)物。 
  3. MTT

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