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ELISA試劑盒操作的時候詳細的操作步驟是什么

更新時間:2015-07-14      瀏覽次數:1784

     ELISA試劑盒操作的時候詳細的操作步驟是什么?

  • 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀 釋。
  • 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl, 然后再加待測樣品 10μl(樣品zui終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡 量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
  • 溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
  • 配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
  • 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此

             重復 5 次,拍干。

  • 加酶:每孔加入酶標試劑 50μl,空白孔除外。
  • 溫育:操作同 3
  • 洗滌:操作同 5
  • 顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色

15 分鐘.

  • 終止:每孔加終止液 50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
  • 測定:以空白空調零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應在加終止 液后 15 分鐘以內進行。
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